4166金沙手机官网通过含抗生素的培养基进行培养

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  某种大肠杆菌的质粒中含有β-半乳糖苷酶α片段序列(图2),大肠杆菌的DNA分子中则含有β-半乳糖酶ω片段序列(图1),由于天然大肠杆菌同时具备这两种片段序列,可以使培养基中含有X-gal底物转变成蓝色产物,当缺少任意一个α或ω片段序列,X-gal底物不能转变成蓝色产物.HindⅢ、EcoRI、BamHI分别为三种限制性内切酶,下图3中箭头所指为三种限制酶的切点.

  (1)要能筛选出转基因菌种,应选用的限制性内切酶是___,选择的依据是___

  (2)控制F8的基因也可以通过人体细胞相应的mRNA来合成,该合成的过程称为___.如果F8基因表示人生长激素基因,则相应的mRNA可以从人体___(下丘脑细胞/垂体细胞/下丘脑和垂体细胞/所有体细胞)中获取.

  (3)重组质粒形成与否需要鉴定和筛选,方法是将重组质粒的DNA分子导入大肠杆菌,通过含抗生素的培养基进行培养,观察大肠杆菌的生长、繁殖情况进行判断,如甲图.

  (4)将经转基因技术处理过的质粒导入大肠杆菌后,再将大肠杆菌接种到含有X-gal底物的培养基培养一段时间后,培养基中出现较多的蓝色菌落,这是因为___.

  (6)如果控制F8的基因长度为3000碱基对(bp),用限制性核酸内切酶酶切后进行凝胶电泳,使降解产物分开.用酶A单独酶切,结果如下图l.用酶B单独酶切,结果如图乙2.用酶A和酶B同时酶切,结果如图乙3.请画出该基因同时用酶A和酶B酶切时的作用位点示意图(并标注好酶切后碱基片断的长度):___.答案(1)当大肠杆菌缺少任意一个α或ω片段序列,X-gal底物不能转变成蓝色产物,所以要破坏质粒中的α片段序列(含两个酶切位点:HindⅢ、EcoRI),利用X-gal底物来检测目的基因是否转入大肠杆菌.质粒和外源DNA分子都含有HindⅢ、EcoRI、4166金沙手机官网BamHI三种限制性内切酶的切割位点,但HindⅢ位于目的基因上,所以不能用该酶切割获取目的基因.所以应选用的限制性内切酶EcoRI切割外源DNA和质粒.

  (2)通过mRNA来合成基因的过程称为逆转录;由于基因的选择性表达,垂体细胞能合成生长激素,故相应的mRNA可以从人体垂体细胞获取.

  (3)由于质粒中含有青霉素抗性基因作为标记基因,故应放入A含有青霉素的培养基中进行培养.

  (4)由于用同一种限制酶作用的目的基因、质粒具有相同的黏性末端,因此会出现质粒的自我环化的空载现象,空载质粒含有完整的α、ω片段序列,能利用培养基中的X-gal底物产生蓝色产物.

  (5)控制F8的基因能在大肠杆菌细胞内得到表达,其遗传学基础是 各种生物共用一套遗传密码子.

  (6)如果控制F8的基因长度为3000碱基对(bp),用酶A单独酶切,结果如下图l.则说明切点在1000碱基对和2000碱基对之间;用酶B单独酶切,结果如图乙2.则说明酶切位点位于在1000碱基对和2000碱基对之间及1000中的400和600之间,用酶A和酶B同时酶切,结果如图乙3,则说明酶切位点如图.

  (4)同一种限制酶作用的目的基因、质粒具有相同的粘性末端,因此会出现质粒的自身环化的空载现象,空载质粒含有完整的α、ω片段序列,能利用培养基中的X-gal底物产生蓝色产物

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